خوب RealtimePCR چیست؟ 🤔
امروزه روش‌های تکثیر و تشخیص اسیدهای نوکلئیک از ارزشمندترین ابزارهای تحقیقات بیولوژیکی هستند. دانشمندان در تمام زمینه های علوم زیستی مثل تحقیقات پایه، بیوتکنولوژی، پزشکی، پزشکی قانونی، تشخیص و غیره، از این روش ها در طیف گسترده ای از کاربردها استفاده می کنن. با توجه به اهمیت نقش تشخیص کمی و کیفی اسید های نوکلئیک در حوزه ی بیولوژی، تکنیک Polymerase Chain Reaction (PCR) انقلابی در این حوزه ایجاد کرد. مطمئن هستیم که همگی شما از اصول پایه ی این تکنیک کاملا آگاهی دارین برای همین ما در مقاله قصد داریم که به مواردی از این تکنیک اشاره می کنیم که دونستنشون شما رو به درک عمیق تری از این تکنیک و انواعش برسونه.
#PCR #RealTimePCR
امروزه روش‌های تکثیر و تشخیص اسیدهای نوکلئیک از ارزشمندترین ابزارهای تحقیقات بیولوژیکی هستند. دانشمندان در تمام زمینه های علوم زیستی مثل تحقیقات پایه، بیوتکنولوژی، پزشکی، پزشکی قانونی، تشخیص و غیره، از این روش ها در طیف گسترده ای از کاربردها استفاده می کنن. با توجه به اهمیت نقش تشخیص کمی و کیفی اسید های نوکلئیک در حوزه ی بیولوژی، تکنیک Polymerase Chain Reaction (PCR) انقلابی در این حوزه ایجاد کرد. مطمئن هستیم که همگی شما از اصول پایه ی این تکنیک کاملا آگاهی دارین برای همین ما در مقاله قصد داریم که به مواردی از این تکنیک اشاره می کنیم که دونستنشون شما رو به درک عمیق تری از این تکنیک و انواعش برسونه.
#PCR #RealTimePCR
⬅️ انواع PCR
1️⃣Common PCR
2️⃣Real-time PCR
3️⃣RT PCR
Common PCR:
👈👈اول از همه میریم سراغCommon PCR (PCRمعمول) که به دلیل فرمت ساده ای که داره بیشترین مدل رایج در دانشگاه هاست. این نوع PCR اسامی دیگه ای هم داره. گاها دیده شده بهش End point PCR( PCR نقطه انتهایی)،Traditional PCR (PCR سنتی) و Conventional PCR ( PCR رایج) هم گفته میشه! این نوع از PCR به روشی برای تکثیر اسیدهای نوکلئیک گفته میشه که میاد اون RNA یا DNA مورد نظر ما رو اونقدرررر تکثیر میکنه که درنهایت ما بیشترین مقدار کپی از قطعه موردنظرمونو داشته باشیم.
🤓👈اگه بخوایم اطلاعات بیشتری وارد ماجرا کنیم، باید بگیم که در طول فرآیند این نوع از PCR، ما باید صبور باشیم چون PCR اونقدرر ادامه پیدا میکنه تا رشته قابل تکثیری که ما تو آزمایش بدنبال اون هستیم، کامل تکثیر بشه و هیچی از مواد اولیه باقی نمونه برای همین بیشترین مقدار کپی رو به ما میده. بعد از تموم شدن پروسه ی PCR برای دیدن نتیجه کار، باید اونو ببریم روی ژل الکتروفورز.
✅️ ژل آگارُز( یه ماده پلیمریه که از بعضی از جلبک های قرمز درست میشه و برای جداسازی مولکول ها استفاده میشه) DNA رو براساس سایز به قطعه های مختلفی تقسیم میکنه. هرچی قطعه کوچیکتر باشه دورتر میره. حالا یعنی چی میره؟ کجا میره؟
👈👈ما به کمک شانه های مخصوصی روی ژل چاهک درست می کنیم. حالا حدود چند میکرولیتر از محصول PCR مون رو که Loading dye مخلوط کردیم توی چاهک ها میریزیم. ژل رو میذاریم داخل تانک الکتروفورز که توش رو با بافر پر کردیم و دستگاه رو میزنیم به برق. چون به دو سمت ژل الکتروفورز جریان برق با جریان منفی و مثبت متصله انتقال جریان از منفی به مثبت ایجاد میشه. .بافری هم توی دستگاه هست رساناست و باعث انتقال جریان برق میشه.. همونطور که همگی ما میدونیم DNA دارای بار منفیه پس با ایجاد جریان برق از قطب منفی به سمت قطب مثبت روی ژل آگارز حرکت می کنه. این جریان باعث میشه که قطعات ژنی با طول ها و وزن های مختلف از هم جدا بشن و به صورت باند در مناطق مختلقفی از ژل قرار بگیرن.
✅️خب حالا باید یه معیاری برای اینکه بفهمیم این باند ها دقیقا قطعه ژنی با چه طولی هستن داشته باشیم. برای این منظور از DNA Ladder استفاده می کنیم. DNA Ladder، یک مخلوطی از انواع توالی DNA است که طولشون مشخصه و به عنوان یک الگو برای فهمیدن طول تقریبی محصول PCR مون استفاده میشه. وقتی کار الکتروفورز تموم شد، ژل رو در محلول اتیدیوم بروماید میغلتونیم و بعد با کمک UV می تونیم کامل باند های ایجاد شده رو ببینیم و تحلیل کنیم. اجازه بدین زیاد وقت برای توضیح تکنیک الکتروفورز نذاریم چون قدیمی های کانال حتما میدونن که ما قبلا کاملا این تکنیک رو در کانال توضیح دادیم. اما فکر کنم دیدن تصویر زیر هم به یادآوری نحوه ی عملکرد الکتروفورز کمک کنه. تو عکس دوم شما کاملا میتونین ببینین که وقتی قطعات ژن های هدف که با دستگاه PCR تکثیر میشن روی ژل الکتروفور چطوری ابر اساس وزن و طولشون از هم جدا میشن. ردیف 1 DNA Ladder هست که چون ما طول توالیش رو میدونیم با کمکش می تونیم طول قطعات ژن های هدفمون رو به صورت تخمینی متوجه بشیم.
🔗آدرس سایت :
RTPmed.com
#PCR
#RealTimePCR
1️⃣Common PCR
2️⃣Real-time PCR
3️⃣RT PCR
Common PCR:
👈👈اول از همه میریم سراغCommon PCR (PCRمعمول) که به دلیل فرمت ساده ای که داره بیشترین مدل رایج در دانشگاه هاست. این نوع PCR اسامی دیگه ای هم داره. گاها دیده شده بهش End point PCR( PCR نقطه انتهایی)،Traditional PCR (PCR سنتی) و Conventional PCR ( PCR رایج) هم گفته میشه! این نوع از PCR به روشی برای تکثیر اسیدهای نوکلئیک گفته میشه که میاد اون RNA یا DNA مورد نظر ما رو اونقدرررر تکثیر میکنه که درنهایت ما بیشترین مقدار کپی از قطعه موردنظرمونو داشته باشیم.
🤓👈اگه بخوایم اطلاعات بیشتری وارد ماجرا کنیم، باید بگیم که در طول فرآیند این نوع از PCR، ما باید صبور باشیم چون PCR اونقدرر ادامه پیدا میکنه تا رشته قابل تکثیری که ما تو آزمایش بدنبال اون هستیم، کامل تکثیر بشه و هیچی از مواد اولیه باقی نمونه برای همین بیشترین مقدار کپی رو به ما میده. بعد از تموم شدن پروسه ی PCR برای دیدن نتیجه کار، باید اونو ببریم روی ژل الکتروفورز.
✅️ ژل آگارُز( یه ماده پلیمریه که از بعضی از جلبک های قرمز درست میشه و برای جداسازی مولکول ها استفاده میشه) DNA رو براساس سایز به قطعه های مختلفی تقسیم میکنه. هرچی قطعه کوچیکتر باشه دورتر میره. حالا یعنی چی میره؟ کجا میره؟
👈👈ما به کمک شانه های مخصوصی روی ژل چاهک درست می کنیم. حالا حدود چند میکرولیتر از محصول PCR مون رو که Loading dye مخلوط کردیم توی چاهک ها میریزیم. ژل رو میذاریم داخل تانک الکتروفورز که توش رو با بافر پر کردیم و دستگاه رو میزنیم به برق. چون به دو سمت ژل الکتروفورز جریان برق با جریان منفی و مثبت متصله انتقال جریان از منفی به مثبت ایجاد میشه. .بافری هم توی دستگاه هست رساناست و باعث انتقال جریان برق میشه.. همونطور که همگی ما میدونیم DNA دارای بار منفیه پس با ایجاد جریان برق از قطب منفی به سمت قطب مثبت روی ژل آگارز حرکت می کنه. این جریان باعث میشه که قطعات ژنی با طول ها و وزن های مختلف از هم جدا بشن و به صورت باند در مناطق مختلقفی از ژل قرار بگیرن.
✅️خب حالا باید یه معیاری برای اینکه بفهمیم این باند ها دقیقا قطعه ژنی با چه طولی هستن داشته باشیم. برای این منظور از DNA Ladder استفاده می کنیم. DNA Ladder، یک مخلوطی از انواع توالی DNA است که طولشون مشخصه و به عنوان یک الگو برای فهمیدن طول تقریبی محصول PCR مون استفاده میشه. وقتی کار الکتروفورز تموم شد، ژل رو در محلول اتیدیوم بروماید میغلتونیم و بعد با کمک UV می تونیم کامل باند های ایجاد شده رو ببینیم و تحلیل کنیم. اجازه بدین زیاد وقت برای توضیح تکنیک الکتروفورز نذاریم چون قدیمی های کانال حتما میدونن که ما قبلا کاملا این تکنیک رو در کانال توضیح دادیم. اما فکر کنم دیدن تصویر زیر هم به یادآوری نحوه ی عملکرد الکتروفورز کمک کنه. تو عکس دوم شما کاملا میتونین ببینین که وقتی قطعات ژن های هدف که با دستگاه PCR تکثیر میشن روی ژل الکتروفور چطوری ابر اساس وزن و طولشون از هم جدا میشن. ردیف 1 DNA Ladder هست که چون ما طول توالیش رو میدونیم با کمکش می تونیم طول قطعات ژن های هدفمون رو به صورت تخمینی متوجه بشیم.
🔗آدرس سایت :
RTPmed.com
#PCR
#RealTimePCR
پس ما با کمک این مدل PCR، میتونیم به سوالات زیر جواب بدیم.
1️⃣آیا قطعه ژنی که مورد نظرمون هست در نمونه ی تحت آزمایشمون وجود داره یا نه! مثلا اگر دنبال این هستین که آیا یک ژن رشد خاص توی نمونه ی سرطانی تکثیر و بیان میشه یا نه!
2️⃣ به صورت تخمینی می تونین طول قطعات ژنی مورد نظرتون رو هم بفهمین. این مسئله تو کلونینگ وقتی میخواین ژن های رو وارد وکتور خاصی بکنین خیلی کمک کننده است.
3️⃣به عکس بالا دقت کنین. میبینین میزان پهنای باند ها با هم فرق داره. هرچه باند پهن تر و پرنور تر باشه یعنی اون قطعه ژنی بیشتر تکثیر شده پس مقدارش تو سلولتون بیشتره. پس تو این روش میزان بیان ژن رو هم تا حدودی میتونین تخمین بزنین.
✅️میبینین چقدر از واژه تخمین استفاده کردم! واسه اینکه در این مدل PCR میزان سنجش بر اساس مقایسه و تخمینه و هیچ عدد و میزان دقیقی به شما داده نمیشه. پس این مدل PCR بیشتر حالت کیفی و یانهایتا نیمه کمی داره که بهش میگن Semi Quantitative.
Rtpmed.com
#realtimePCR
#pcr
1️⃣آیا قطعه ژنی که مورد نظرمون هست در نمونه ی تحت آزمایشمون وجود داره یا نه! مثلا اگر دنبال این هستین که آیا یک ژن رشد خاص توی نمونه ی سرطانی تکثیر و بیان میشه یا نه!
2️⃣ به صورت تخمینی می تونین طول قطعات ژنی مورد نظرتون رو هم بفهمین. این مسئله تو کلونینگ وقتی میخواین ژن های رو وارد وکتور خاصی بکنین خیلی کمک کننده است.
3️⃣به عکس بالا دقت کنین. میبینین میزان پهنای باند ها با هم فرق داره. هرچه باند پهن تر و پرنور تر باشه یعنی اون قطعه ژنی بیشتر تکثیر شده پس مقدارش تو سلولتون بیشتره. پس تو این روش میزان بیان ژن رو هم تا حدودی میتونین تخمین بزنین.
✅️میبینین چقدر از واژه تخمین استفاده کردم! واسه اینکه در این مدل PCR میزان سنجش بر اساس مقایسه و تخمینه و هیچ عدد و میزان دقیقی به شما داده نمیشه. پس این مدل PCR بیشتر حالت کیفی و یانهایتا نیمه کمی داره که بهش میگن Semi Quantitative.
Rtpmed.com
#realtimePCR
#pcr
❓️❓️حالا یه سوال دارم. بنظرتون از کجا میتونیم بفمیم که اگر روی ژل باند ندیدین واقعا قطعه ژنی مدنظرمون تکثیر نشده یا روشمون یا مواد مورد استفادمون مشکل داشته؟!
✅️برای اینکه اینو متوجه بشیم اول باید با مفهوم ژن های خانه دار (House Keeping Genes) آشنا بشیم. ژن های خانه دار واقعا خانه دارهستن!!! یعنی همیشه در خونه که همون سلول هست حضور دارن. چرا؟ چون حضورشون برای بقای سلول حیاتیه. مثل ژن های مربوط به آنزیم های همانندسازی، رونویسی و ترجمه.
👈توی ویکی پدیا بزنین لیست کاملی از تمامی ژن های خانه دار رو براتون میاره اما پر مصرف ترینشون تو کارهای تحقیقاتی و بالینی ژن های GAPDH، Beta actin و RNAase P هستن.
✅️پس اگر برای این ژن ها PCR بذاریم همیشه باید باند ببینیم و اگر نبینیم یعنی یه جای کارمون تو انجام PCR مشکل داشته. به همین دلیل خیلییی مهمن و همیشه باید در کنار قطعه ی ژنی موردنظرمون روی ژل باندشون رو ببینیم تا مطمئن بشیم که PCR رو درست انجام دادیم.
و با توجه به اینکه طول قطعه اش رو هم میدونیم راحت میتونیم روی ژل تشخیصش بدیم.
#RealTimePCR #PCR
Rtpmed.com
✅️برای اینکه اینو متوجه بشیم اول باید با مفهوم ژن های خانه دار (House Keeping Genes) آشنا بشیم. ژن های خانه دار واقعا خانه دارهستن!!! یعنی همیشه در خونه که همون سلول هست حضور دارن. چرا؟ چون حضورشون برای بقای سلول حیاتیه. مثل ژن های مربوط به آنزیم های همانندسازی، رونویسی و ترجمه.
👈توی ویکی پدیا بزنین لیست کاملی از تمامی ژن های خانه دار رو براتون میاره اما پر مصرف ترینشون تو کارهای تحقیقاتی و بالینی ژن های GAPDH، Beta actin و RNAase P هستن.
✅️پس اگر برای این ژن ها PCR بذاریم همیشه باید باند ببینیم و اگر نبینیم یعنی یه جای کارمون تو انجام PCR مشکل داشته. به همین دلیل خیلییی مهمن و همیشه باید در کنار قطعه ی ژنی موردنظرمون روی ژل باندشون رو ببینیم تا مطمئن بشیم که PCR رو درست انجام دادیم.
و با توجه به اینکه طول قطعه اش رو هم میدونیم راحت میتونیم روی ژل تشخیصش بدیم.
#RealTimePCR #PCR
Rtpmed.com
👈👈👈به صورت خلاصه اگر بخوام بگم در صورتی که شما روی ژلتون دو تا باند دیدین یعنی هم کارتون رو دست انجام دادین و هم ژن مورد نظرتون توی هست و تکثیر شده، اگر فقط باند ژن خانه دار رو دیدین یعنی کارتون رو درست انجام دادین ولی ژن مورد نظرتون توی سلول وجود نداره و تکثیر نشده. و در نهایت اگر اصلا هیچ باندی ندیدین باید حتما به روش انجام PCR و یا موادتون بخصوص طراحی پرایمرتون شک کنین.
🤓البته با توجه به اینکه پرایمر های طراحی شدتون برای ژن هدف و ژن خانه دار متفاوت است اگر باندی از ژن هدفتون ندیدین ممکن هست که تو طراحی پرایمر ژن هدفتون اشتباه کرده باشین اما حداقل مطمئن هستین که پروسه رو درست انجام دادین.
✅️راستی! هنوز مواد لازم برای انجام این مدل PCR رو با هم بررسی نکردیم:
توالی پرایمر که اختصاصا برای قطعه ژنی موردنظرمون سنتز شده. (یادتون باشه که هم برای ژن هدف و هم برای ژن خانه دارتون باید پرایمر داشته باشین مستر میکس واکنش که حاوی تمام موادی است که برای انجام PCR نیازه. مثل آنزیم Taq Polymerase، تمام انواع بازهای مورد نظر DNA ( Dntp ها)و بافر و نمک های یونی لازم.
و درنهایت DNA استخراج شده از سلول هدفتون که حتما قبلش باید با دستگاه نانودراپ کیفیتش رو سنجیده باشین.
✅️دستگاه هایی همکه احتیاج داریم دستگاه ترموسایکلر PCR، دستگاه ژل الکتروفورز و دوربین برای عکس برداری از ژلمون هست.
چون فعلا میخوایم انواع PCR رو با هم بررسی کنیم پروسه انجام کار رو توضیح نمیدیم. اگر کسی هست اینجا که میخواد PCR معمولی بذاره و نیاز به پروتکل داره لطفا بهمون بگه تا به خاطر ایشون پروتکل کامل انجام تست PCR معمولی را بذاریم.
#PCR #RealTimePCR
Rtpmed.com
🤓البته با توجه به اینکه پرایمر های طراحی شدتون برای ژن هدف و ژن خانه دار متفاوت است اگر باندی از ژن هدفتون ندیدین ممکن هست که تو طراحی پرایمر ژن هدفتون اشتباه کرده باشین اما حداقل مطمئن هستین که پروسه رو درست انجام دادین.
✅️راستی! هنوز مواد لازم برای انجام این مدل PCR رو با هم بررسی نکردیم:
توالی پرایمر که اختصاصا برای قطعه ژنی موردنظرمون سنتز شده. (یادتون باشه که هم برای ژن هدف و هم برای ژن خانه دارتون باید پرایمر داشته باشین مستر میکس واکنش که حاوی تمام موادی است که برای انجام PCR نیازه. مثل آنزیم Taq Polymerase، تمام انواع بازهای مورد نظر DNA ( Dntp ها)و بافر و نمک های یونی لازم.
و درنهایت DNA استخراج شده از سلول هدفتون که حتما قبلش باید با دستگاه نانودراپ کیفیتش رو سنجیده باشین.
✅️دستگاه هایی همکه احتیاج داریم دستگاه ترموسایکلر PCR، دستگاه ژل الکتروفورز و دوربین برای عکس برداری از ژلمون هست.
چون فعلا میخوایم انواع PCR رو با هم بررسی کنیم پروسه انجام کار رو توضیح نمیدیم. اگر کسی هست اینجا که میخواد PCR معمولی بذاره و نیاز به پروتکل داره لطفا بهمون بگه تا به خاطر ایشون پروتکل کامل انجام تست PCR معمولی را بذاریم.
#PCR #RealTimePCR
Rtpmed.com
خوب خسته نباشید دوستان 😊🙏
اگر سوالی دارید حتما در کامنت ها از ما بپرسین و یا راجب به موضوعی که نیاز دارید بیشتر بدانید برای ما بنویسید که در کانال حتما بارگزاری کنیم.🍀
🔗آدرس سایت:
Rtpmed.com
اگر سوالی دارید حتما در کامنت ها از ما بپرسین و یا راجب به موضوعی که نیاز دارید بیشتر بدانید برای ما بنویسید که در کانال حتما بارگزاری کنیم.🍀
🔗آدرس سایت:
Rtpmed.com
سلام دوستان عزیز 😉👋
✳️در اینجا روش های تشخیصی رایج در آزمایشگاه ها جهت تشخیص انواع سرطان ها برای شما توضیح داده شده است.
1️⃣برای مشاهده اول وی پی ان خود را خاموش کنید.
2️⃣بعد روی لینک زیر کلیک کنید.
⬇️⬇️
https://www.rtpmed.com/%d8%b1%d9%88%d8%b4-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%aa%d8%b4%d8%ae%db%8c%d8%b5%db%8c-%d8%b1%d8%a7%db%8c%d8%ac-%d8%af%d8%b1-%d8%a2%d8%b2%d9%85%d8%a7%db%8c%d8%b4%da%af%d8%a7%d9%87-%d9%87%d8%a7-%d8%ac%d9%87%d8%aa/
✳️در اینجا روش های تشخیصی رایج در آزمایشگاه ها جهت تشخیص انواع سرطان ها برای شما توضیح داده شده است.
1️⃣برای مشاهده اول وی پی ان خود را خاموش کنید.
2️⃣بعد روی لینک زیر کلیک کنید.
⬇️⬇️
https://www.rtpmed.com/%d8%b1%d9%88%d8%b4-%d9%87%d8%a7%db%8c-%d8%aa%d8%b4%d8%ae%db%8c%d8%b5%db%8c-%d8%b1%d8%a7%db%8c%d8%ac-%d8%af%d8%b1-%d8%a2%d8%b2%d9%85%d8%a7%db%8c%d8%b4%da%af%d8%a7%d9%87-%d9%87%d8%a7-%d8%ac%d9%87%d8%aa/
کیت تشخیص HPV operon⭕️
جهت مشاهده جزئیات محصول روی لینک زیر کلیک کنید 👇
https://www.rtpmed.com/products/molecular-pannel/%da%a9%db%8c%d8%aa-%d8%b4%d8%aa%d8%ae%db%8c%d8%b5-%d9%85%d9%88%d9%84%da%a9%d9%88%d9%84%db%8c-opegen-high-low-papillomastrip/
جهت مشاهده جزئیات محصول روی لینک زیر کلیک کنید 👇
https://www.rtpmed.com/products/molecular-pannel/%da%a9%db%8c%d8%aa-%d8%b4%d8%aa%d8%ae%db%8c%d8%b5-%d9%85%d9%88%d9%84%da%a9%d9%88%d9%84%db%8c-opegen-high-low-papillomastrip/
💥تا ۵۰ درصد تخفیف 💥
شما می توانید از طریق فروشگاه رادمان تشخیص پارس تجهیزات و ملزومات آزمایشگاهی را خریداری نمایید.
آدرس سایت:
Shop.rtpmed.com
#رادمان_تشخیص_پارس
شما می توانید از طریق فروشگاه رادمان تشخیص پارس تجهیزات و ملزومات آزمایشگاهی را خریداری نمایید.
آدرس سایت:
Shop.rtpmed.com
#رادمان_تشخیص_پارس
💥تا ۵۰ درصد تخفیف 💥
شما می توانید از طریق فروشگاه رادمان تشخیص پارس تجهیزات و ملزومات آزمایشگاهی را خریداری نمایید.
آدرس سایت:
Shop.rtpmed.com
#رادمان_تشخیص_پارس
شما می توانید از طریق فروشگاه رادمان تشخیص پارس تجهیزات و ملزومات آزمایشگاهی را خریداری نمایید.
آدرس سایت:
Shop.rtpmed.com
#رادمان_تشخیص_پارس
کیت HCV Real Quant PCR برند GBC موجود می باشد. جهت دریافت اطلاعات بیشتر با ما در ارتباط باشید.
☎️۰۲۱۸۸۵۴۹۷۶۰
☎️۰۲۱۸۸۵۴۹۷۶۳
✉️info@gmail.com
🌐Shop.rtpmed.com
🌐rtpmed.com
☎️۰۲۱۸۸۵۴۹۷۶۰
☎️۰۲۱۸۸۵۴۹۷۶۳
✉️info@gmail.com
🌐Shop.rtpmed.com
🌐rtpmed.com